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2025-06-17

FFPE样本RNA提取试剂盒使用要点

FFPE样本RNA提取试剂盒在分子生物学研究中具有重要意义,然而RNA本身的不稳定性使得在使用该试剂盒时需要特别关注一些要点。

样本的选择和处理是第一步。要选择质量较好的FFPE样本,避免使用有明显退变或污染的样本。在切片时,要尽量减少RNA的暴露时间,防止其被环境中的RNase降解。切片后应尽快进行后续操作,或者将其保存在合适的环境中。

裂解过程是提取RNA的关键环节。裂解液中含有能抑制RNase活性的成分,要确保样本与裂解液充分接触和混合。裂解时间要根据样本的大小和性质进行调整,一般需要适当延长,以保证RNA充分释放。同时,裂解过程要在冰上进行,降低RNase的活性,减少RNA的降解。

提取过程中的分离和纯化步骤也不容忽视。不同的试剂盒可能采用不同的分离方法,如离心、过滤等。在操作过程中,要严格按照说明书的要求进行,避免RNA的损失。纯化过程可以去除蛋白质、DNA等杂质,提高RNA的纯度,但要注意纯化试剂的用量和作用时间。

最后,提取后的RNA保存要得当。RNA应保存在无RNase的环境中,一般使用DEPC处理过的水或专门的RNA保存液。保存温度通常为 -80℃,以最大程度地保持RNA的稳定性。

总之,使用FFPE样本RNA提取试剂盒时,要从样本处理、裂解、分离纯化到保存等各个环节都严格把控,才能获得高质量的RNA,满足后续实验的需求。