做过核酸提取的人，大概都有这个体会：食用菌菌丝样本DNA提取较难。提叶片，提菌液都顺畅的试剂盒，一换成菌丝得率就往下掉，A260/230也上不去，到了PCR那步还容易卡壳。

问题到底出在哪？难点主要卡在四个地方。

1、细胞壁是第一关：

菌丝的壁是几丁质骨架，比细菌的肽聚糖墙硬得多，裂解液泡不开，不破壁得率直接见底，研磨珠破壁这步是从“可有可无”变成“决定成败”的关键。

2、多糖是最大的纯度杀手：

食用菌多糖含量普遍高，破壁之后跟DNA一起释放出来，化学性质还跟核酸接近——都能被醇沉淀，柱子和磁珠都爱“误吸”。多糖残留的典型症状：沉淀发黏拉丝像胶冻、Nanodrop浓度虚高、A260/230偏低、PCR扩不出来。

3、多酚和色素：

菌龄老的菌丝多酚含量高，氧化之后发褐，跟DNA结合成复合物，影响下游酶反应。

4、样本本身的状态也有影响：

菌龄太老，壁更厚、多糖更多、内源核酸酶活性也高，幼嫩菌丝明显好提。

核心策略

针对菌丝这种又硬又杂的样本，核心就两件事：破壁要够彻底，去杂要够干净。

具体做法上，用高效裂解液配合特制缓冲液，再搭配专用钢珠，通过珠磨的方式把坚硬的菌丝打碎。机械力直接破壁，比单纯靠化学裂解更彻底。

案例分享

用户：某生物研究所

样本：食用菌菌丝

试剂：新百基植物组织DNA提取试剂盒（RM2016）

仪器：奥盛32A自动化核酸提取仪

实验流程

1、预处理：将样本放入裂解管中，破碎仪破壁后加入裂解液；

2、DNA提取：将预处理后的样本放入自动化核酸提取仪中进行DNA提取。

实验结果

PCR扩增电泳结果

• A260/A280 在1.8–2.0 之间：纯度达标；
• A260/A230 大于2.0：多糖、多酚这类杂质残留低；
• 浓度大于100 ng/μL ：得率良好；
• 电泳条带明显，产物不影响下游PCR反应。

四个菌丝样本，A260/A280 在 1.8–2.0，A260/A230 大于 2.0，浓度都超过 100 ng/μL。钢珠珠磨破壁配合高效裂解，再进行自动化提取，能轻松应对食用菌菌丝这类特殊样本DNA提取。

官网链接：动植物血液DNA/RNA提取_磁珠法纯化试剂盒_外包技术服务-新百基生物