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2025-01-08

植物FFPE样本提取的流程是什么?

植物FFPE(福尔马林固定、石蜡包埋)样本提取的流程,是一个精细且多步骤的过程,旨在从经过特殊处理的植物组织中提取出高质量的核酸或蛋白质,以供后续的分子生物学研究使用。

这一流程首先始于样本的采集与预处理。科研人员需精心挑选具有代表性的植物组织,迅速投入福尔马林中以固定其形态结构,防止细胞自溶和腐败,同时保持组织的抗原性。固定后的样本需经过一系列梯度乙醇脱水处理,逐步替换出水分,为接下来的石蜡渗透创造条件。

石蜡渗透与包埋是流程中的关键环节。在真空或加热条件下,熔融的石蜡缓缓渗入组织间隙,取代乙醇,使组织块变得坚硬且易于切片。包埋后的组织块冷却凝固,即可进行切片操作,获得薄而均匀的组织片。

提取步骤则依据目标分子的不同而有所差异。对于核酸提取,常采用蛋白酶K消化结合酚-氯仿抽提法,以去除蛋白质和杂质,纯化核酸;而蛋白质提取则可能涉及更复杂的缓冲液体系及离心、过滤等物理手段,以分离和富集目标蛋白。

每一步骤都需严格控制条件,如温度、时间、试剂浓度等,以确保提取效率和纯度。最终,经过精心提取的植物FFPE样本将为科研工作者提供宝贵的生物信息,助力揭示植物生长发育、逆境响应等生命奥秘。