让DNA提取不再困难|冰冻组织切片、穿刺液DNA提取
在分子生物学研究中,DNA提取是最基础也是最重要的实验步骤之一。今天,我们就来分享两种常见样本——冰冻组织切片和穿刺液的DNA提取经验,希望能为你的实验提供一些参考。
为什么关注这两种样本?
冰冻组织切片和穿刺液是临床研究和基础医学研究中常见的样本类型:
冰冻组织切片:常用于病理诊断和生物标志物研究,样本量小但珍贵
穿刺液:来源于淋巴结、囊肿、关节腔等部位,细胞成分复杂
这两种样本的共同特点是:样本量有限且质量要求高,因此提取方法需要既高效又温和。
案例一:冰冻组织切片DNA提取
常见问题
冰冻切片提取DNA时经常遇到:得率低、DNA降解、纯度不佳等问题。这主要是因为冰冻过程中形成的冰晶会损伤细胞结构,同时反复冻融也会导致DNA断裂。
我们的解决方案
第一步:样本预处理
组织切片研磨后,加入裂解缓冲液。
第二步:DNA提取
自动化提取:将第一步的混合液加入对应96深孔板的试剂孔,上机,打开程序即可完成DNA提取。
手动提取:按照试剂盒操作详情进行DNA提取。
试剂:新百基组织/细胞DNA提取试剂盒(M2012)
案例二:穿刺液DNA提取
样本特点
穿刺液样本通常量少(100-500μl),细胞数量差异大,且常含有血液、炎症细胞等干扰成分。不同部位的穿刺液成分差异显著,需要针对性处理。
我们的经验
第一步:细胞收集
将样本离心后收集细胞。
第二步:DNA提取
自动化提取:将第一步处理后的混合液加入对应的96深孔板试剂孔进行DNA提取。
手动提取:按照试剂盒操作流程进行DNA提取。
试剂:新百基组织/细胞DNA提取试剂盒(M2012)
实验结果
样本类型 | 样品编号 | 浓度(ng/μl) | A260/A280 |
冰冻切片 | 01 | 165.74 | 1.81 |
02 | 128.48 | 1.83 | |
03 | 140.31 | 1.86 | |
04 | 132.77 | 1.82 | |
穿刺液 | Y1 | 68.65 | 1.85 |
Y2 | 45.86 | 1.80 | |
Y3 | 43.99 | 1.83 |
数据由新百基生物提供
所得DNA产物进行qPCR检测,测得癌变基因百分比与细胞学检验癌变细胞比例一致。
关键注意事项
及时提取:穿刺液采集后最好在2小时内处理,否则细胞会自溶。
避免反复冻融:如果必须保存,分装后-80℃冻存,避免反复取出。每次取出时,用干冰运输,防止样本温度波动。
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