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2024-07-17

核酸提取纯化方法,该如何选择?

核酸提取主要包括脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)的提取纯化,两者在生物研究,疾病研究等领域应用广泛。目前针对DNARNA的提取方法主要分为三种:

一、酚氯仿法

酚氯仿法是最经典的一种方法。其原理是利用苯酚作为蛋白质的变性剂,‌通过反复抽提使蛋白质变性,‌同时使用SDS(‌十二烷基磺酸钠)‌裂解细胞膜,‌在蛋白酶K、‌EDTA的存在下消化蛋白质或多肽小分子,‌使核酸从核蛋白中游离出来。适用于从细胞或组织中提取总RNADNA。这种方法的特点是:成本低。但是由于酚和氯仿都有毒性,对操作者身体健康造成威胁,且‌核酸回收率较低,‌不利于保护RNA,‌难以进行微量化操作。

二、离心柱法

离心柱法是一种基于离心膜柱的核酸提取法,广泛用于试剂盒提取。其原理是利用柱膜孔径大小的选择性和亲和性吸附作用,可以在离心力的作用下将核酸从样品中分离出来,该方法操作简便、提取效率高,适用于大规模样本的核酸提取。‌但存在高度依赖吸附膜的结合能力,‌洗脱不完全导致核酸流失的问题,且难以实现自动化。

三、磁珠法

磁珠法顾名思义是利用带有特点官能团的磁珠吸附核酸分子,在提取过程中,将磁珠与样品混合,通过磁场的作用使磁珠与核酸结合。然后,通过洗涤和洗脱等步骤,将核酸从磁珠上分离出来。该方法操作简单,提取效率高,适用高通量和自动化提取,但需要注意的是磁珠受污染和磁场干扰。

 

三种方法比对表


方法
优点缺点

酚氯仿


成本低


有毒性,‌核酸回收率较低,‌不利于保护RNA,‌难以进行微量化操作

离心住


方法操作简便、提取效率高,适用于大规模样本的核酸提取


难以实现自动化


磁珠法


该方法操作简单,提取效率高,可高通量和自动化提取


磁珠和试剂的使用剂量需要严格控制,否则影响核酸的得率和质量


总结:以上各种方法各有优缺点,如何选择需根据具体的样本类型、实验条件和实验目的。 

新百基生物是一家专业提供磁珠法核酸提取解决方案的企业,含有多种磁珠法核酸提取试剂盒,包含血浆,血液,组织,菌液,粪便等核酸提取试剂盒;食用油,植物组织,土壤,深加工肉类核酸提取试剂盒。