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2025-12-01

植物基因组 DNA 提取的前处理秘籍,做好这步实验成功一半

在植物分子生物学研究中,高质量的基因组DNA是 PCR、测序、Southern blot 等下游实验的基础,而样本前处理作为DNA提取的第一步,直接决定了后续提取效率和 DNA 质量。看似简单的采样、研磨与预处理,实则藏着诸多关键技巧,掌握这些技巧能让实验事半功倍。


对于叶片等常规植物组织,快速冷冻是保存样本的核心要点。采集后的样本需立即用液氮冷冻,这是因为液氮的超低温环境能迅速抑制植物体内核酸酶的活性,防止 DNA 降解。研究证实,选用幼嫩的植物样品并在采集后即刻液氮冷冻,能最大程度保证 DNA 的高得率和完整性,避免因样本放置时间过长导致的核酸降解问题。


研磨操作则是释放细胞内 DNA 的关键环节,需将植物材料研磨至细腻的粉末状。以试管树苗为例,选取增殖生长 30 天左右的顶部嫩梢,研磨成粉末后再进行后续处理,能显著提升 DNA 提取效果。这是因为幼嫩组织的细胞壁更易破碎,且所含的次生代谢物相对较少,研磨后的粉末状结构也能让裂解液与样本充分接触,提高核酸释放效率。


针对茶叶、柑橘、香蕉等富含多糖多酚的特殊植物样本,仅靠常规前处理无法去除大量次生代谢物,这些杂质会严重干扰核酸提取过程。中国科学院武汉植物园研发的专利预处理方法为此提供了有效解决方案:先用 HB 抽提缓冲液重悬样本,涡旋混匀后过滤,再通过多次抽提缓冲液洗涤,能针对性去除多糖多酚类杂质,为后续 DNA 提取扫清障碍。


样本前处理是植物基因组DNA提取的 “第一道关卡”,根据样本类型选择合适的前处理方式,才能为后续的试剂盒提取步骤打下良好基础,最终获得高质量的 DNA 样本。