首页
产品中心
服务支持
新闻中心
联系我们

新闻中心

首页 新闻中心 行业新闻
2025-02-23

ffpe共提试剂盒使用了哪些技术原理?

FFPE(福尔马林固定石蜡包埋)共提试剂盒旨在从FFPE样本中同时提取DNA和RNA,其运用了多种技术原理,以下为你详细介绍:

样本预处理技术原理
- 脱蜡处理
FFPE样本中的石蜡会阻碍后续核酸提取操作,因此需先进行脱蜡。通常采用有机溶剂(如二甲苯)溶解石蜡,使组织暴露出来。这是因为石蜡是一种非极性物质,二甲苯也是非极性有机溶剂,根据相似相溶原理,二甲苯能有效溶解石蜡。之后,通过离心或洗涤步骤去除溶解的石蜡,为后续核酸释放创造条件。
- 水化处理
脱蜡后的组织需要进行水化,一般使用梯度乙醇溶液逐步降低组织中的有机溶剂浓度,使组织恢复到接近生理状态,便于后续的裂解操作。这是基于乙醇与水可以任意比例互溶的特性,通过梯度乙醇处理,能温和地将组织从有机溶剂环境过渡到水环境。

核酸释放技术原理
- 蛋白消化
使用蛋白酶K等酶类来消化组织中的蛋白质。蛋白酶K可以特异性地切割蛋白质中的肽键,破坏蛋白质与核酸之间的结合,使核酸从蛋白质复合物中释放出来。在适当的温度和缓冲液条件下,蛋白酶K能够高效地发挥作用,同时保持核酸的完整性。
- 裂解缓冲液作用
裂解缓冲液中通常含有表面活性剂(如SDS)和变性剂(如尿素)。表面活性剂可以破坏细胞膜和核膜的脂质双分子层结构,使细胞内容物释放出来;变性剂则可以使蛋白质变性,进一步促进核酸的释放。此外,裂解缓冲液的pH值和离子强度也经过精心调配,以维持酶的活性和核酸的稳定性。

核酸分离技术原理
- 硅胶膜吸附原理
硅胶膜在高盐低pH值的条件下,能够与核酸分子发生特异性结合。这是因为核酸分子在这种条件下带负电荷,而硅胶膜表面带有正电荷,通过静电相互作用使核酸吸附在硅胶膜上。而蛋白质、多糖等杂质则不与硅胶膜结合,从而实现核酸与杂质的分离。当改变溶液的盐浓度和pH值为低盐高pH值时,核酸与硅胶膜的结合力减弱,核酸可以被洗脱下来。
- 磁珠分离原理
磁珠表面经过特殊修饰,能够在特定条件下与核酸结合。例如,一些磁珠表面包被有能够与核酸特异性结合的基团。在核酸提取过程中,磁珠与裂解液中的核酸结合,然后通过磁力架施加磁场,使磁珠聚集,从而将结合有核酸的磁珠与其他杂质分离。经过洗涤步骤去除杂质后,再通过改变条件使核酸从磁珠上解离下来。

核酸纯化技术原理
- 洗涤去除杂质
使用洗涤液去除吸附在核酸上的残留蛋白质、盐离子等杂质。洗涤液的成分和配方经过优化,既能有效去除杂质,又能保持核酸与硅胶膜或磁珠的结合。一般通过多次洗涤步骤,确保核酸的纯度。
- RNase和DNase抑制
为了防止核酸在提取过程中被降解,试剂盒中通常会添加RNase和DNase抑制剂。这些抑制剂可以与核酸酶结合,抑制其活性,从而保护DNA和RNA的完整性。例如,RNase抑制剂可以与RNase特异性结合,阻止其对RNA的切割作用。