从入门到精通:磁珠实验必须掌握的5个细节
核酸:包括DNA和RNA两大种类。核酸提取纯化的方法很多,主要包括:有机萃取(如:酚氯仿法),离心柱法和磁珠法。其中磁珠法以操作简单,提取效率高,可高通量和自动化的优势广泛受科研人员和实验室工作者青睐。而磁珠又是这一方法的核心部分,正确使用磁珠,能提高核酸产量和纯度。下面就介绍一下磁珠使用的注意事项:
150nm粒径磁球(成都新百基生物)
一、充分混匀磁珠
由于重力和磁珠特性,在长时间静置的条件下,容易沉降,出现珠浆不均匀,颜色也不均匀的现象。所以在使用前应立即涡旋混匀,直到浆液呈均匀的颜色,并且所有珠子都处于悬浮状态,如果磁珠悬浮液不是均质的,则会影响提取浓度或纯度。
二、选择合适的磁珠用量,即DNA/RNA-Beads比率
使用前必须确定磁珠起始量与获得的 DNA/RNA 量直接相关。磁珠如果太多,可能会得到污染物。磁珠太少,可能会影响产量。因此,在使用磁珠时,务必保证移液器量取的准确性,清理掉挂在移液器吸头外侧的任何液滴并定期校准移液器,使用良好的移液规范。
三、选择相匹配的磁珠
选择与样本类型(血液、组织、FFPE等)和核酸(DNA/RNA)匹配的磁珠(如硅基磁珠、羧基磁珠)。
选择与实验目的相匹配粒径大小的磁珠。
四、小心移液
使用磁珠提取DNA/RNA时,常常会存在“移出废液”的步骤,在这些步骤中丢失一些磁珠是正常的,所以在移液时应尽量减少磁珠的损耗。保持手指稳定,吸液速度不要太快,因为吸液的强度可以克服磁力。
五、磁珠的保存
磁珠在保存时切勿冷冻保存,应防止磁珠冻结(有特殊说明的磁珠除外)。磁珠冷冻后再解冻,表面容易出现裂痕,影响性能,从而影响提取效果。
一般情况下磁珠的保存条件为:2-8℃。值得注意的是,使用时也需要提前将磁珠置于室温,使其有足够的预热时间,一般为30min左右。
新百基拥有自主研发、生产磁珠技术平台,结合不同的缓冲液体系并根据样本种类搭配不同磁珠类型和用量,已成功生产78类提取试剂盒,提取产物高纯高得率,可直接用于下游应用,如:PCR,qPCR,二代测序,文库构建,芯片检测等。
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