“破壁”?无破壁仪也可以
微生物,泛指广泛存在于自然界中的、体形微小、结构简单、肉眼直接观察不到、必须借助光学显微镜或电子显微镜放大数百倍、数千倍,甚至数万倍才能观察到的微小生物。包括原核微生物(如细菌、古菌)、真核微生物(如真菌、原生生物)和非细胞微生物(如病毒)。
原核微生物和真核微生物往往含有坚实的细胞壁,在对这类样本进行核酸(DNA/RNA)提取时,受细胞壁的限制,简单的预处理方法很难释放细胞内的核酸(DNA/RNA)。
通常实验室裂解细胞壁,有以下3种方案:
方案一:物理法(珠磨法、超声法)
原理:将样品与微小的、坚硬的珠子(如氧化锆、玻璃珠、陶瓷珠)混合,通过高速振荡或涡旋,利用珠子之间的剪切力和碰撞来破碎细胞。或者利用超声波探头产生的高频声波,在液体中形成空化气泡,气泡破裂产生强烈的冲击波和剪切力来破碎细胞。
优点:高效、通用性强、可高通量处理。
缺点:可能产生热量,需在冰上操作或使用带冷却功能的破碎仪;可能会打断基因组DNA,获得片段较小的DNA。需购置破碎仪,增加预算。
方案二:化学法(碱裂解,去污剂、螯合剂)
原理:利用化学试剂溶解或削弱细胞壁的结构。
优点:速度快,成本低
缺点:对厚壁细胞溶解有限,某些方法破坏核酸
方案三:酶学消化法(溶菌酶、溶壁酶、蛋白酶K)
原理:使用特异性酶解细胞壁的特定成分,方法温和,能较好地保持核酸完整性。
优点:温和、保持核酸完整
缺点:成本高
以上3种方案各有优缺点,其中方案一和方案二可能会破坏核酸,对有序检测要求较高的用户不适用。方案三温和、能保持核酸完整性,但成本较高。
那么有没有一种既能不破坏核酸,成本又不高的方案?
——新百基新百基微生物核酸(DNA/RNA)提取试剂盒,货号:M2028,是一款专门从各种样本中提取微生物核酸(DNA/RNA)的试剂盒,此试剂盒采用酶学消化法,在保证核酸不被破坏的前提下,有效溶解细胞壁,释放核酸,得到高浓度高纯度的产物。
样本:拭子、全血、粪便、新鲜痰液、肺泡灌洗液,微生物培养液等。
产品应用
将大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、酿酒酵母和猪圆环病毒、禽流感H9疫苗稀释液添加至口腔拭子、全血、粪便样本中,按照新百基微生物核酸提取试剂盒的流程进行提取,提取产物通过荧光定量PCR进行核酸定量。
链接:https://www.bio-keystone.com/xyyb/333.html
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