RNA作为生命过程的关键分子，其功能多样性和动态调控特性，使其在生物分子学研究中扮演着重要角色。作为遗传信息的传递者，广泛应用于基因功能研究，为疾病发现和精准医疗提供数据支持。由于RNA自身的理化性质，在提取和纯化RNA时，容易受到污染和降解，所以在RNA提取过程中，防止RNA降解和污染是关键。

一、控制环境因素

（1）实验室分区设计

样本准备区：用于样本预处理（如匀浆、裂解），需远离核酸污染源。

RNA提取区：专用超净台或通风橱，配备离心机、涡旋仪等设备，避免交叉污染。

PCR区（如需后续实验）：与提取区物理隔离，防止气溶胶污染。

电泳/检测区：用于RNA质量检测（如Nanodrop、电泳），远离其他核酸操作区。

（2）单向工作流

实验流程应从“清洁区”到“污染风险区”，避免反向移动。

提取区建议使用正压HEPA过滤系统，减少气溶胶污染。

（3）RNase污染防控

实验台面定期用RNase清除剂擦拭。

移液器、离心管等仅限RNA操作使用，避免与其他实验混用。 

明确标记“RNase-Free”区域和耗材，与非RNA实验区域分开存放。

使用带滤芯的吸头（Barrier Tips）和预灭菌离心管。

实验过程中全程佩戴无RNase手套，频繁更换。

二、规范操作流程

（1）样本处理

快速操作：样本采集后立即液氮冷冻或放入RNA稳定剂（如RNAlater），避免内源RNase降解。

低温环境：全程在冰上操作（除特定步骤如37℃裂解）。

（2）RNA提取纯化

选择合适的裂解液：使用含强变性剂（如TRIzol、胍盐）的裂解液迅速灭活RNase。

匀浆彻底：组织样本需充分匀浆，确保RNA完全释放。

分相步骤（如TRIzol法）：避免吸取中间层（DNA污染）或有机相（蛋白污染）。

沉淀：使用无RNase的乙醇或异丙醇，沉淀时间不宜过长（通常30分钟，-20℃）。

洗涤步骤：用无酶水配制的75%乙醇洗涤沉淀，避免过度干燥（导致RNA难溶解）。

溶解RNA：用无RNase水或TE缓冲液（pH 7.0-8.0）溶解。

（3）RNA保存

短期保存：4℃；长期保存：分装后存于-80℃，避免多次冻融。

三、质量检测

浓度与纯度：用Nanodrop检测A260/A280（1.8-2.0）和A260/A230（>1.8）。

完整性：通过琼脂糖电泳观察28S/18S rRNA条带比例（约2:1）。